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液相色谱仪的主要系统构成及特点

 发布时间:2011-07-01 点击量:3105

   在很多的时候会不自觉的讲液相色谱仪与气相色谱仪进行比较,看它们各自的构成及其特点,这里介绍液相色谱仪的主要系统构成及特点,包括输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统等,并且各自有着与众不同之处:

  *.分离系统,相对来说分离系统由色谱柱、连接管和恒温器等部分构成,色谱柱一般长度为1050cm(需要两根连用时,可在二者之间加一连接管),内径为25mm,由"不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成,住内装有直径为510μm粒度的固定相(由基质和固定液构成).固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成,它们都有惰性(如硅胶表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔径可达1000?)和比表面积大的特点,加之其表面经过机械涂渍(与气相色谱中固定相的制备一样),或者用化学法偶联各种基因(如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等)或配体的有机化合物。因此,这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。

  另外,固定相基质粒小,柱床极易达到均匀、致密状态,极易降低涡流扩散效应。基质粒度小,微孔浅,样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。根据柱效理论分析,基质粒度小,塔板理论数N就越大。这也进一步证明基质粒度小,会提高分辨率的道理。再者,液相色谱仪的恒温器可使温度从室温调到60C,通过改善传质速度,缩短分析时间,就可增加层析柱的效率。

  第二.进样系统,一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作,进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。

  第三.输液系统,

  液相色谱仪的输液系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。流动相贮存错和梯度仪,可使流动相随固定相和样品的性质而改变,包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值,或改用竞争性抑制剂或变性剂等。这就可使各种物质(即使仅有一个基团的差别或是同分异构体)都能获得有效分离。

  高压泵的一般压强为l4744X107Pa,流速可调且稳定,当高压流动相通过层析柱时,可降低样品在柱中的扩散效应,可加快其在柱中的移动速度,这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。

  第四,就是数据处理系统该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印和处理等操作,使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展。

  第五.检测系统液相色谱仪常用的检测器有紫外检测器、示差折光检测器和荧光检测器三种。

  1.紫外检测器主要拥有这样的特点:使用面广(如蛋白质、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用);灵敏度高(检测下限为10-10gml);线性范围宽;对温度和流速变化不敏感;可检测梯度溶液洗脱的样品。

  2.示差折光检测器目前这一系统通用性强、操作简单,但灵敏度低(检测下限为10-7gml),流动相的变化会引起折光率的变化,因此,它既不适用于痕量分析,也不适用于梯度洗脱样品的检测。

  3.荧光检测器凡具有荧光的物质,在一定条件下,其发射光的荧光强度与物质的浓度成正比。因此,这一检测器只适用于具有荧光的有机化合物(如多环芳烃、氨基酸、胺类、维生素和某些蛋白质等)的测定,其灵敏度很高(检测下限为10-1210-14gml),痕量分析和梯度洗脱作品的检测均可采用。

  通过以上的信息可以看出一个液相色谱仪的设计时很复杂的,在很多的方面需要协调性,并且分工合理,该液相色谱仪也是一款性能相当不错的色谱仪!

  

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