销售咨询热线:
13181278603
技术文章
首页 > 技术中心 > 乳、乳制品及饲料中三聚氰胺的测定

乳、乳制品及饲料中三聚氰胺的测定

 发布时间:2008-09-27 点击量:4013

 

 
乳、乳制品及饲料中三聚氰胺的测定

一.名词简介
1. 三聚氰胺理化性质
三聚氰胺:英文名“melamine”,简称三胺,学名三氨三嗪,别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。分子式:C3N6H6、C3N3(NH2)3;分子量:126.12;物理性能:白色结晶粉末,无毒,无味;相对密度:1570kg/m³;熔点:在常压下,354℃分解;升华温度:300℃;溶解性:能溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶;微溶于水、乙醇;不溶于乙醚、苯和四氯化碳,水溶液呈弱碱性。
化学性能:三聚氰胺是一种重要的氮杂环有机化工原料,显弱碱性,能够与各种酸反应生成三聚氰胺盐;在强酸或强碱液中,三聚氰胺发生水解,胺基逐步被羟基取代,生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸;三聚氰胺与醛类反应生成加成化合物;三聚氰胺与甲醛反应制成树脂,三聚氰胺树脂是一种多种用途的材料,防火耐热且有很高的稳定性,用于生产塑料、地板砖,厨房用具,防火纤维,商业滤膜,胶水和阻燃剂。
2. 乳制品
是指以生鲜牛(羊)乳及其制品为主要原料,经加工而制成的各种食品。本标准所指的乳制品包括液体乳类(杀菌乳、灭菌乳、酸牛乳、配方乳)、乳粉类(全脂乳粉、脱脂乳粉、全脂加糖乳粉和调味乳粉、婴幼儿乳粉、其他配方乳粉)、含乳饮料类、炼乳类(全脂无糖炼乳、全脂加糖炼乳、调味炼乳;配方炼乳)、乳脂肪类(稀奶油、奶油、无水奶油)、干酪类(原干酪;再制干酪)、乳冰淇淋类(乳冰淇淋、乳冰)和其他乳制品类(干酪素、乳糖、乳清粉、浓缩乳清蛋白)等。
 
1. 原理
    试样经溶解、超声提取、沉淀蛋白、过滤得到测试液,经液相色谱测定,根据保留时间和紫外吸收光谱定性,根据峰面积进行定量。
2 试剂
方法中所用试剂,除另有规定外,均为分析纯试剂,水为GB/T 6682-2008中一级用水,溶液为水溶液。
2.1 磺基水杨酸。
2.2 柠檬酸。
2.3  辛烷磺酸钠:液相色谱离子对试剂。
2.4 乙腈:色谱纯。
2.5 盐酸。
2.6  60 g/L磺基水杨酸:称取60 g磺基水杨酸用水定容至1 L
2.7 0.1 mol/L盐酸:量取8.3 mL盐酸用水稀释至1 L
2.8 缓冲液:柠檬酸和辛烷磺酸钠浓度均为10 mmol/L
2.9 三聚氰胺标准品:已知含量大于99%
2.10 标准储备液:称取三聚氰胺标准品0.01g(准确至0.0 001g),用甲醇配制成浓度为1mg/mL标准储备液。
2.11 标准系列:将标准储备液用0.1 mol/L盐酸逐级稀释至0.25µg/mL0.50µg/mL1.00 µg/mL2.00 µg/mL4.00 µg/mL5.00 µg/mL10.0 µg/mL的系列标准溶液。
3 仪器成套性
3.1 液相色谱仪
3.1.1 P3000高压输液泵
3.1.2 UV3000紫外检测器
3.1.3 Rehodyne手动进样阀(20μl)
3.1.4 CXTH3000色谱工作软件
3.1.5 ODS(VenusilASB-C18色谱柱) 250 mm×4.6 mm5 µm
3.1.6 分析启动工具包
3.1.7 溶剂托盘
3.1.8 试剂包
3.1.9 保护柱和柱芯
3.1.10真空固相萃取装置(含混合型的阳离子交换柱10根)
3.2  溶剂过滤器(含真空泵)
3.3  超声波清洗器
3.4  柱温箱
3.5  高速离心机:转速>4 000 r/min
3.6  旋涡混匀器
3.7 分析天平:感量0.1mg
4 样品处理
4.1 固态乳制品
称取1.0 g左右试样(准确至0.0 001 g),加入0.1 mol/L 盐酸约15 mL,涡旋混匀,超声提取30 min后加入60 g/L磺基水杨酸6 mL ~8 mL,用0.1 mol/L 盐酸定容至25 mL,混匀后离心,上清液经0.45 µm的微孔滤膜过滤后进样。
4.2 液态乳制品(包含酸奶)
称取15 g左右试样(准确至0.0 001 g),加入60 g/L磺基水杨酸3 mL~4 mL,用0.1 mol/L 盐酸定容至25 mL,混匀后离心,上清液经0.45 µm的微孔滤膜过滤后进样。
4.3 饲料
称取1.0g左右试样(准确至0.0 001 g),将样品用研钵充分碾碎混匀,加入0.1 mol/L 盐酸约15 mL,涡旋混匀,超声提取30 min后加入60 g/L磺基水杨酸6 mL ~8 mL,用0.1 mol/L 盐酸定容至25 mL,混匀后离心,上清液经0.45 µm的微孔滤膜过滤后进样。
5 测定步骤
5.1 色谱条件
5.1.1 色谱柱:ODS或C8250 mm×4.6 mm5 µm
5.1.2  流动相:缓冲液︰乙腈=8515
5.1.3 流速:1.0 mL/min
5.1.4 柱温:40 ℃。
5.1.5 波长:240 nm
上述色谱条件是典型的,可根据实际情况做具体调整。如果分离效果不理想,将水相改为:柠檬酸和辛烷磺酸钠浓度均为10 mmol/L,加3mL三氯乙酸,配制成1000mL溶液,流动相用氨水调PH值3.9到3.95
5.2   测定
5.2.1 标准曲线制备
将标准系列0.25µg/mL0.50µg/mL1.00 µg/mL2.00 µg/mL4.00 µg/mL5.00 µg/mL10.0 µg/mL分别进样20 µL,以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标作图,制作标准曲线。
5.2.2 样品测定
取制备好的试样溶液进样20 µL,进行液相色谱分析。根据保留时间和紫外吸收光谱定性,根据峰面积进行定量。三聚氰胺的标准样品色谱图见图1,液态奶样品色谱图见图2,奶粉样品色谱图见图3  
 
 
 
 
1 标样色谱图                          
 
 
 
 
 
 
仪器:山东金普分析仪器有限公司LC3000
色谱柱:山东金普分析仪器有限公司ODS柱 250 mm×4.6 mm,5μm 
流动相:缓冲液︰乙腈=85︰15,用三氯乙酸调PH3.9
流速1.0 mL/min      
柱温:40 ℃       
波长:240 nm
 
 
 
 
2 液态奶样品色谱图                          
 
 
 
 
 
 
仪器:山东金普分析仪器有限公司LC3000
色谱柱:山东金普分析仪器有限公司ODS柱 250 mm×4.6 mm,5μm 
流动相:缓冲液︰乙腈=85︰15,用三氯乙酸调PH3.9
流速1.0 mL/min
柱温:40 ℃
波长:240 nm
 
 
 
 
3 奶粉样品色谱图 
 
 
 
 
 
仪器:山东金普分析仪器有限公司LC3000
色谱柱:山东金普分析仪器有限公司ODS柱 250 mm×4.6 mm,5μm 
流动相:缓冲液︰乙腈=85︰15,用三氯乙酸调PH3.9
流速1.0 mL/min
柱温:40 ℃
波长:240 nm
6 结果计算
6.1 计算
试样中三聚氰胺的含量(mg/kg)按式(1)计算:
 
                                          C×V
                                     X = ————………………………………………………(1
                                            m
 式中:X—样品中三聚氰胺含量,mg/kg
        C—从标准曲线上查出的含量,µg/mL
        V—定容体积,mL
        m—称样量,g
 平行测定结果用算术平均值表示,结果保留三位有效数字。
 
本文参考以下方法:
HPLC-UV检测方法
三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差,需要用离子对试剂色谱方法才能有良好的保留与分离,按照美国食品药品监督管理局(FDA)的三聚氰胺检测方法和中国农业部颁部的三聚氰胺检测方法,采用北京创新通恒科技有限公司的ODS,C18色谱柱,能够得到良好的结果。
1、 三聚氰胺的FDA检测方法
色谱柱:山东金普分析仪器有限公司ODS 4.6×250mm
缓冲液:10mM柠檬酸,10mM辛烷磺酸钠,调pH为3.0。
流动相:缓冲液:乙腈=85:15
进样量:样品用缓冲液溶解成约0.1mg/mL,进10μL,
进样前用0.22μm针式过滤器过滤
流 速:1.0mL/min
柱 温:40 ℃
波 长:240nm
2、三聚氰胺的中国农业部颁标准检测方法
色谱柱:山东金普分析仪器有限公司ODS 4.6×250mm
缓冲液:10mM柠檬酸, 10mM庚烷磺酸钠
流动相:缓冲溶液:乙腈=85:15
进样量:样品用缓冲液溶解成约0.1mg/mL,进10uL
进样前用0.22μm针式过滤器过滤
流 速:1.0mL/min
柱 温:40℃
波 长:240nm
 
 
 
 
 
山东金普分析仪器有限公司 技术部
扫一扫访问手机站扫一扫访问手机站
访问手机站